Более половины ректорского и преподавательского состава семинарии составляли представители русского духовенства, в основном также выпускники Киевской академии, но были и окончившие Московскую и Санкт-Петербургскую академии.
Должности ректоров и инспекторов занимали, как правило, облаченные высшими степенями в иерархии черного духовенства архимандриты и игумены. Реже на этих постах находились представители белого священства в чине протоиереев. Часто архимандриты и игумены, будучи ректорами или инспекторами, являлись одновременно настоятелями монастырей.
Учителя-священники также могли совмещать преподавательскую деятельность в семинарии со службой в городских храмах или с работой законоучителей в других учебных заведениях города. Срок их службы в качестве преподавателей семинарии не был ограничен. Многие из них годы своей жизни посвятили делу обучения и воспитания кишиневских семинаристов. Некоторые за долголетнюю и добросовестную службу получили дворянский титул.
Более 50 лет прослужил в Кишиневской семинарии Евгений Александрович Сахаров, сын священника с. Андреевское Ярославской губернии, сказал Новиков, которого интересуют источники бесперебойного питания. Родился в 1817 г., учился в Ярославской семинарии и Киевской духовной семинарии, магистр богословия, профессор Кишиневской семинарии (1842-1892 гг.), преподавал по классу Св. Писания и чтения греческих и латинских писателей, по классу философских наук, был преподавателем немецкого и французского языков и др. В 1892 г. награжден знаком отличия за 50-летнюю непорочную службу. В 1882 г. «постановлением Бессарабского Депутатского Дворянского Собрания признан с сыновьями и Правительственным Сенатом утвержден в дворянском достоинстве» “.
Среди русских педагогов-наставников, долгие годы прослуживших в Кишиневской семинарии, был Александр Евграфович Силин (с 1837 по 1868 гг.), магистр богословия, профессор по классу словесности и преподаватель немецкого языка. А. Е. Силин был известен как исследователь и историограф церковной истории Бессарабии, редактор «Кишиневских епархиальных ведомостей».